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免疫親和柱有著怎樣的使用要點(diǎn)?
  • 更新日期:2022-01-14     信息來源:本站      瀏覽次數(shù):1292
    •    免疫親和柱的原理:

        本實(shí)驗(yàn)測(cè)定的基礎(chǔ)是抗原抗體間的特異性反應(yīng)。單克隆抗體被偶聯(lián)在柱內(nèi)凝膠上,樣品中的經(jīng)過提取、過濾、稀釋;然后將樣品提取液通過鍵合有抗體的親和柱。
      此時(shí),鍵合在親和柱中的抗體上。之后用蒸餾水將親合柱上的雜質(zhì)除去。用甲醇洗脫親和柱,將從抗體上分離下來。將過濾的甲醇溶液注入熒光計(jì)或HPLC進(jìn)行測(cè)定。
       
        特點(diǎn):
        1、采用定向偶聯(lián)技術(shù),抗體載量大,有效柱容量高。所有親和柱產(chǎn)品柱容量均滿足國標(biāo)對(duì)于商品化柱容量的要求;
       
        2、凝膠粒徑均勻,過柱自然流速即可,不需額外加壓;
       
        3、采用抗體定向偶聯(lián)技術(shù),樣本回收率高;
       
        4、操作簡(jiǎn)便,可洗脫后直接進(jìn)樣,無需氮吹。
       

      免疫親和柱

       

        免疫親和柱的使用要點(diǎn):
        1、上柱的樣品溶液應(yīng)該保持酸堿中性、無懸浮物、甲醇濃度不宜過高;
       
        2、若樣品為復(fù)雜樣品,例如高蛋白、高油脂、酸性樣品,可以將提取液分兩次提取樣品,可以提高提取效果;
       
        3、樣品過柱及甲醇洗脫速度要慢且均勻,約每秒1-2滴;
       
        4、抗原抗體發(fā)生反應(yīng)的最佳溫度是在25℃左右,實(shí)驗(yàn)需要的環(huán)境溫度最好是室溫24℃-28℃,太高或太低的溫度都會(huì)對(duì)回收率有一定的影響。在使用前需要恢復(fù)至室溫再進(jìn)行實(shí)驗(yàn);
       
        5、不要在無水狀態(tài)下,瓊脂容易干燥萎縮,影響質(zhì)量;
       
        6、儲(chǔ)存條件為4℃-8℃。切記0℃以下的低溫,因?yàn)榫彌_液凍結(jié),會(huì)嚴(yán)重影響親和柱內(nèi)的物理結(jié)構(gòu),對(duì)質(zhì)量影響很大;
       
        7、洗脫一般選擇試劑甲醇,為增強(qiáng)洗脫效果可加大甲醇體積;
       
        8、樣液免疫凈化后,洗脫液過0.45um或更小孔徑濾膜效果更好。

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